< Назад | Содержимое | Далее >
ПРОСТЕЙШИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ. Т е х н и к а в з я т и я к р о в и . Кровь из пальца можно получить при помощи любого колющего инструмента: иглой от шприца, писчим пером, оспопрививательным перышком и т. д. Наиболее удобным инструментом является спе- циальная игла для взятия крови. Она состоит из ланцета с пружиной, который находится в металлическом футляре. На ланцет навинчивается муфта так, чтобы острие ланцета выстояло на большую или меньшую величину (обычно 2—3 мм). Иглу обеззараживают спиртом, тщательно протирая ее. Место кожи, где берется кровь, протирают спиртом, а затем эфиром. Кровь берут из ногтевой фаланги пальца больного. Если руки больного загрязнены, то предварительно их нужно вымыть мылом со щеткой. Иглу втягивают в футляр (колпачок), который плотно приставляют перпендикулярно к пальцу; затем нажимают замок, пружина спускается, игла пробивает кожу на глубину, соответствующую выступающему из колпачка кончику иглы. Поэтому предварительно устанавливают длину кончика ланцета, выстоящего из муфты. Первую выступившую каплю стирают кусочком стерильной марли. Кровь берут из второй и следующих капель. После взятия крови нужно приложить к месту укола кусочек стерильной марли или ваты и предложить больному прижать ее другим пальцем.
О п р е д е л е н и е к о л и ч е с т в а г е м о г л о б и н а производят при помощи гемометра. Он состоит из металлического футляра, в середину которого вставляется пустая маленькая гра- дуированная пробирка с делениями от 10 до 140. По обе ее стороны находятся две запаянные пробирки, содержащие определенной кре- пости раствор солянокислого гематина. В новых приборах вместо пробирок помещают сплошные стеклянные палочки соответствующего цвета.
Перед взятием крови в совершенно чистую и сухую пробирку до метки 10 наливают децинормальный раствор соляной кислоты Кровь берут из пальца, насасывая ее капиллярной пипеткой, приложенной к прибору до метки 20. Кончик пипетки обтирают ваткой опускают пипетку до дна пробирки и осторожно выдувают кровь в раствор. Затем этот раствор втягивают и выдувают обратно в пробирку несколько раз, чтобы смыть оставшуюся в пипетке кровь В результате смешивания крови с соляной кислотой гемоглобин переходит в солянокислый гематин, и раствор приобретает коричневый цвет. Через несколько минут в этот раствор прибавляют пипеткой по каплям дестиллированную воду и помешивают стеклянной палочкой до тех пор, пока цвет раствора испытуемой крови срав-
ИССЛЕДОВАНИЕ ^КРОВИ 637
пяется с цветом боковых стандартных пробирок. Деление пробирки, которое будет соответствовать уровню раствора, укажет• процент содержания гемоглобина в данной крови. Условно считается, что при 100% гемоглобина и 5 000 000 эритроцитов в 1 мм3 цветной показатель
равен 1.
Цветной показатель вычисляется по следующей формуле: коли- чество гемоглобина исследуемой крови относится к нормальному количеству гемоглобина так, как количество эритроцитов данной крови к нормальному количеству эритроцитов. Например, в исследуемой крови определено 60% гемоглобина и 4 000 000 эритроцитов; цветной показатель будет равен:
_60_ 4 000 000 60 х 5 000 000
100 : 5000000' ИЛИ 100x4 000 000 '
После сокращения получают:
|2і|=15=о,75.
5x4 20
Упрощенный способ определения цветного показателя: число най- денного процента гемоглобина (например, 60) делят на удвоенное число сотен тысяч найденного количества эритроцитов (например, 40; 40x2=80).
80~20~4~U'/0-
О п р е д е л е н и е к о л и ч е с т в а ф о р м е н н ы х эле- м е н т о в к р о в и . Кровь набирают в особые смесители, которые представляют собой капиллярные пипетки, заканчивающиеся не- большим стеклянным резервуаром с небольшой свободно лежащей стеклянной бусинкой. Пипетка смесителя для счета красных кровяных телец посредине имеет метку 0,5, в конце — 1, а где оканчивается резервуар — 101. Пипетка < смесителя для лейкоцитов имеет такие же деления, но только резервуар ее меньше и в конце его стоит метка И.
Для счета эритроцитов кровь разбавляют 3% раствором поваренной соли. В качестве разбавляющей жидкости для счета лейкоцитов пользуются 5% раствором уксусной кислоты, которая рас-• творяет эритроциты и совершенно не изменяет лейкоцитов.
Для счета эритроцитов берут смеситель с большим резервуаром, насасывают кровь до деления 0,5 или 1 (лучше брать кровь до 0,5), обтирают кончик смесителя ваткой и сразу опускают смеситель в раствор поваренной соли и насасывают его до метки 101. Затем за- жимают концы смесителя пальцами одной руки и встряхивают: бусинка в резервуаре равномерно распределяет форменные элементы.
Для счета лейкоцитов берут смеситель с меньшим резервуаром, насасывают кровь до метки 1, обтирают кончик смесителя ваткой и затем набирают до метки 11 раствор уксусной кислоты. По окончании иасасывания раствора смеситель хорошенько встряхивают, зажав его концы.
638 ПРОСТЕЙШИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Форменные элементы крови можно считать только под микро-
ИССЛЕДОВАНИЕ, КРОВИ
рате. После подсчета эритроцитов во всем большом квадрате полу-
639
скопом в специальной счетной камере. Счетная камера состоит из толстого предметного стекла, на которое наклеен стеклянный кружок. Дно камеры (кружка) представляет тончайшую сетку, состоящую из больших квадратов, из которых каждый в свою очередь разделен на 16 маленьких квадратиков.
Каждый большой квадрат, который под микроскопом занимает почти все поле зрения, отделен от другого тремя тончайшими линиями. Сторона маленького квадратика равна 1/20 мм, а площадь, следовательно, 1/400 мм2. Камера окружена рамкой, которая на 0,1 мм выше сетки. На рамку кладется толстое шлифованное стекло.
Расстояние между сеткой и стеклом равняется 0,1 мм; следова- тельно, объем одного деления на сетке составит:
1/ioX1/4oo=1/4ooo мм3.
Кружок от рамки отделяется небольшим углублением, куда может вылиться излишек крови, нанесенной на сетку. Существуют различные счетные камеры, устроенные по атому принципу.
Наиболее удобной является камера Предтеченского-Ключарева. На предметном стекле прикреплены две стеклянные пластинки, служащие опорой для покровного стекла. Между ними находится средняя пластинка, плоскость которой на 0,1 мм ниже предыдущих. Эта пластинка разделена на две части поперечным желобком. На каждую половину средней пластинки нанесено по одной сетке, состоящей из 100 больших квадратиков. Каждый большой квадратик разделен па 16 маленьких.
Камера, углубление, рамка и покровное стекло должны быть со- вершенно чисты и сухи. Прежде чем пустить разбавленную кровь па сетку, нужно снова несколько раз встряхнуть смеситель, как указано выше, чтобы форменные элементы распределились равномерно. Затем выпускают из смесителя 1—2 капли на фильтровальную бумагу и лишь после этого наносят небольшую капельку раствора на сетку. Капелька должна быть только такого объема, чтобы покрыть всю сетку. Когда капля нанесена, ее осторожно, чтобы, не образовалось воздушных пузырей, покрывают покровным стеклом, которое плотно прижимают к рамке.
В камере Предтеченского-Ключарева сначала плотно накладывается покровное стекло, а затем капля разведенной крови, висящая на конце смесителя, подносится сбоку к щели между сеткой и покровным стеклом. Жидкость равномерно распределяется между сеткой и покровным стеклом, а излишек ее стекает в поперечный желобок.
Для экономии времени можпо на одну сетку пустить кровь для подсчета эритроцитов, а на другую — для подсчета лейкоцитов.
Для более или менее точного подсчета красных кровяных телец достаточно сосчитать их в 5 больших или S0 маленьких квадратиках. Счет производят в определенном порядке. Удобнее всего начинать С верхнего левого маленького квадратика. Считают все эритроциты, расположенные внутри квадратика, а затем на верхней и левой границе. После этого переходят к следующим квадратикам п так сосчитывают количество эритроцитов во всем большом квад-
ченное число записывают и препарат подвигают под микроскопом на следующий большой квадрат. Таким образом сосчитывают эритроциты в 5 больших квадратах. Предположим, что в 5 больших или 10 малых квадратах мы насчитали 448 эритроцитов; следовательно,
в одном малом квадрате их будет-тт-г-. Выше было указано, что
4 объем малого квадратика равен т^-
— мм3, значит в 1 мм3 эритроцитов в 4 000 раз больше, т. е.-^-х4 000.
Кровь была разбавлена
в 200 раз, следовательно, в действительности эритроцитов должно быть в 200 раз больше, чем мы сосчитали:
^4°^°=448х1000х10=4480000.
Это и будет число, указывающее количество красных кровяных телец в
1 мм3 исследуемой крови. Практически не нужно производить всех указанных арифметических вычислений; достаточно к сосчитанному числу эритроцитов прибавить четыре нуля, чтобы получить количество эритроцитов в 1 мм3.
Для подсчета белых кровяных телец препарат готовится таким же образом. Так как лейкоцитов гораздо меньше и на большой квадрат их приходится всего 3—4, то нужно сосчитывать их в большем количестве квадратов, по крайней мере в 25.
Если пользоваться камерой Тома-Цейсса, в которой всего 16 больших квадратов, приходится производить подсчет 2 раза, а при более точном подсчете и больше.
Поэтому для счета, особенно лейкоцитов, удобнее пользоваться камерой Предтеченского-Ключарева.
Вычисление производится аналогично подсчету эритроцитов. Предположим, что в 25 больших квадратах или 400 (25 Х16) малых было сосчитано 74 лейкоцита. На один малый квадрат приходится
1
1
1
^ лейкоцитов. Полагая, что объем одного малого квадрата равен
£Щ1 мм , кровь для счета лейкоцитов была разбавлена в 10 раз,
получим количество лейкоцитов в 1 мм3:
* 74x4000x10
400 74x10x10=7 400.
Практически следует к сосчитанному числу лейкоцитов прибавить два нуля.
П р и г о т о в л е н и е м а з к о в к р о в и и их окр а с к а . Делают укол в палец, как было указана выше, и к выступившей капле, не касаясь пальца, прикладывают предметное стекло с какого-либо одного края. Поело этого стекло поворачивают каплей вверх и берут его между первым и третьцм пальцем левой Руки. Первым и третьим пальцем правой руки берут покровное
640 ПРОСТЕЙШИЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
стекло, приставляют его плотно ребром к предметному стеклу, при- близительно под углом в 45°, подводят к капле крови и после того, как кровь распределится вдоль ребра покровного стеклышка, быстро проводят им по предметному стеклу. Мазок можно производить не покровным стеклышком, а предметным, но только шлифованным. В таком случае желательно предварительно обломать угол стеклышка, чтобы мазок был меньше ширины стекла (по середине стекла), — получается тонкий равномерный мазок крови. Через 5—10 минут ой высыхает.
П р и г о т о в л е н и е т о л с т о й к а п л и . На предметное стекло берут большую каплю крови, размазывают ее иглой до величины серебряного гривенника и кладут стекло вверх кровью, чтобы капля высохла.
Когда кровь подсохла, мазок фиксируют (закрепляют). Для фиксации удобнее всего пользоваться метиловым спиртом; можно фиксировать и денатурированным спиртом. Предметные стекла складывают попарно мазками наружу и ставят стаканчик (кюветку) наклонно. Препараты держат в метиловом спирту от 3 до 5 минут, а в денатурированном — 10 минут, после чего их вынимают пинцетом, промывают дестиллированной водой и ставят вертикально, чтобы дать высохнуть. Препарат с толстой каплей не фиксируют.
Затем приступают к окраске мазков. Наиболее простой и дающей очень хорошие результаты является краска Романовского-Гимза, которая состоит из двух красок: красной — эозина (кислая краска) и синей — азура (основная краска). Перед окраской готовую краску Романовского-Гимза разбавляют дестиллированной водой из расчета одна капля краски на 1 мл воды и встряхивают, чтобы получился равномерный раствор. На стекло наливают приготовленную заранее краску Ромаповского-Гимза таким образом, чтобы ода тонким слоем покрыла весь препарат, но не стекала с краев. Окрашиваются препараты приблизительно в течение 20—25 минут, после чего краска смывается дестиллированной водой. Окраску и промывку препарата с толстой каплей нужно производить очень осторожно, потому что нефиксированная» толстая капля легко смывается водой или раствором краски.
Эритроциты окрашиваются эозином в розовый цвет. Лейкоциты окрашиваются по-разному, причем ядра имеют всегда сродство к основным краскам, а потому окрашиваются в темный цвет, протоплазма же окрашивается различно в зависимости от вида лейкоцитов. Ядра лимфоцитов окрашиваются в темнофиолетовый цвет, а тонкий слой протоплазмы — в сине-голубой. Ядра моноцитов обыкновенно окрашиваются не так интенсивно, как ядра лимфоцитов, протоплазма моноцитов синевато-серого цвета. Кроме того, моноциты отличаются от лимфоцитов тем, что у первых слой протоплазмы значительно шире, ядро расположено эксцентрично и имеет неправильные контуры. В протоплазме моноцитов иногда наблюдаются включения в виде отдельных зернышек красновато-фиолетового цвета. Нейтрофилы имеют несколько ядер (сегментов), соединенных между собой очень тонкими нитями, которые окрашиваются в темнофиолетовый цвет; мелкие зернышки протоплазмы окрашиваются одинаково как эозином, так и азуром, а потому принимают
і
ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ 641
фиолетовый цвет. Протоплазма нейтрофилов как бы нейтральна к обеим краскам, почему эти клетки и получили название нейтрофилов. Зерна протоплазмы эозинофилов крупнее зерен нейтрофилов и окрашиваются исключительно эозином в яркокрасный цвет; отсюда эти клетки и получили название эозинофилов. Базофилы состоят из лопастного ядра и крупных зерен, которые красятся главным образом основными красками (азуром), а потому и ядро, и зерна окрашиваются в темнофиолетовый цвет. Кровяные пластинки (тромбоциты) окрашиваются в фиолетовый цвет.
Окрашенные мазки крови лучше всего рассматривать под ми- кроскопом с масляной иммерсией.
Л е й к о ц и т а р н а я ф о р м у л а ( п р о ц е н т н о е о т н о ш е н и е р а з н ы х в и д о в л е й к о ц и т о в к о б щ е м у их ч и с л у ) .
Л е й к о ц и т а р н а я ф о р м у л а н о р м а л ь н о й к р о в и : лимфоцитов — 20—25%, моноцитов — 4—6%, нейтрофилов
— 55—65%, эозинофилов — 2—4%, базофилов — 0—1%. Эта формула показывает, что у здорового человека с нормальным составом крови она в известных пределах может видоизменяться. В патологических же случаях лейкоцитарная формула может значительно меняться независимо от общего количества белых кровяных телец.
При лейкоцитозе обычно наблюдается не раь^омерное увеличение всех видов лейкоцитов, а увеличение только одного или 2—3 видов, количество же других видов лейкоцитов может даже уменьшаться. Соотношение отдельных элементов формулы при многих, особенно инфекционных, болезнях довольно постоянно для данной болезни. Так, для туберкулеза характерно увеличение лимфоцитов. Увеличение количества эозинофилов наблюдается при различных гельмиптозах, при бронхиальной астме. Малярия сопровождается увеличением числа моноцитов. При крупозном воспалении легких и всевозможных септических (гнойных) заболеваниях наблюдается нейтрофильный лейкоцитоз, т. е. лейкоцитоз за счет увеличения нейтрофилов.
О п р е д е л е н и е с к о р о с т и о с е д а н и я э р и т р о - ц и т о в (РОЭ) производят в приборе Панченкова, который пред- ставляет собой деревянный штатив определенной величины со встав- ленными в него строго вертикально специальными пипетками, удер- живаемыми пружиной; кончик пипетки упирается в кусочек мягкой резины. Набирают в пипетку 5% раствор лимоннокислого натрия до метки 50, выдувают его в солонку; из укола пальца набирают крови до верхней метки (всю пипетку) и выдувают ее в ту же солонку. Таким способом набирают кровь 2 раза. Хорошо перемешав кровь с лимоннокислым натрием, набирают полную пипетку смеси и ставят в штатив, отметив время. Эритроциты оседают, и над ними остается прозрачный желтый слой плазмы. Ровно через час отсчитывают количество делений (в миллиметрах) сверху от уровня плазмы до уровня кровяного столбика. Для более четких результатов запись ведут каждые 15 минут, ибо интенсивность оседания все время меняется, особенно при заболеваниях. У здоровых мужчин (взрослых) РОЭ равна 8 мм в час, у женщин — 10 мм; она ускорена у детей,
Мед. справочник